摘要:
目的 提取弓形虫体外细胞共培养上清,并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法 收集对数生长期的THP-1细胞以5×105/ml细胞浓度接种于不同培养瓶中,对照组加入含10%胎牛血清的RPMI 1640,实验组加入相同体积不同数量(2×107/ml、4×107/ml、8×107/ml)弓形虫速殖子培养上清,采用四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490值)并计算THP-1细胞增殖抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以Western印迹方法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性。结果 MTT法检测结果弓形虫培养上清呈时间剂量依赖性抑制THP-1细胞株增殖,倒置显微镜下观察处理组细胞有发泡现象和凋亡小体出现。流式细胞仪检测弓形虫感染后的THP-1细胞凋亡率较对照组有升高趋势(p<0.05),呈量效依赖性,Westernblot检测刚地弓形虫培养上清作用于THP-1细胞48 h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组的比值分别有明显的升高与降低(p<0.05)。结论 刚地弓形虫速殖子培养上清对体外培养THP-1细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导THP-1细胞凋亡。