摘要：

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外分离培养；观察Brdu、DAPI以及Hoechst33342体外染色的合适时间和最佳剂量，比较三种方法的优缺点。方法 BMSCs取自SD雄性大鼠的股骨和胫骨，然后采用贴壁分离培养法对BMSCs进行分离培养，当BMSCs培养至第三代时，采用流式细胞仪对其表面抗原CD34、CD44、CD45进行测定；同时分别用Brdu、DAPI以及Hoechst33342对BMSCs进行染色标记，Brdu标记效果用免疫细胞化学方法检测，DAPI和Hoechst33342的标记率用荧光显微镜观测，最后用MTT检测BMSCs的细胞增值率，观察三种不同方法体外染色的合适时间和最佳剂量，同时比较其优缺点。结果 流式细胞仪检测发现BMSCs表达CD44阳性，CD34和CD45阴性；BMSCs染色前后其表面标志表达无明显统计学差异（P<0.05）；Brdu染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是10μmol/L、48小时；DAPI染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是20μg/ml、30分钟；Hoechst33342染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是5μg/ml、1小时。结论 采用粘附贴壁分离培养法能够有效获取高纯度的BMSCs；运用Brdu、DAPI以及Hoechst33342三种方法标记BMSCs效果良好，方法可靠、合理，为研究BMSCs体内追踪打下了基础。

关键词: 流式细胞仪, 表面标志物, 细胞分离, 细胞染色, 骨髓间充质干细胞

中图分类号: 

• R3