›› 2014, Vol. 36 ›› Issue (6): 668-673.doi: 10.3969/j.issn.1006-6055.2014.06.013

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RNA干扰靶向沉默COX-2基因对MG-63骨肉瘤细胞生物学特性的研究

陈秀锦 杨明宣 崔兆辉 胡旭昌 汪静 安丽萍 马靖琳 王栓科   

  1. 兰州大学第二临床医学院骨科/甘肃省骨关节疾病研究重点实验室,兰州730000
  • 出版日期:2014-12-25 发布日期:2014-12-30

  • Online:2014-12-25 Published:2014-12-30

摘要:

目的 通过构建小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)降低MG-63骨肉瘤细胞环氧合酶-2(COX-2)基因的表达,并进一步研究其对MG-63骨肉瘤细胞增值、侵袭、迁移能力的影响及分子机制。方法 设计靶向干扰COX-2基因的siRNA,通过脂质体转染MG-63骨肉瘤细胞,使其抑制MG-63骨肉瘤细胞COX-2基因的表达,后采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室实验研究其对MG-63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,采用RFQ-PCR和Westernblot分别从基因和蛋白的水平检测MG-63骨肉瘤细胞侵袭性相关因子基质金属酶(MMP-9)的表达及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 转染MG-63骨肉瘤细胞后,实验组与阴性对照组和空白对照组比较,通过RFQ-PCR和Westernblot检测COX-2基因表达降低约90%(P<0.05),MTT检测MG-63骨肉瘤细胞增值能力明显受到抑制(P<0.05),Transwell实验检测MG-63骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力明显下降(P<0.05),经RFQ-PCR、Westernblot检测侵袭性相关因子MMP-9和血管内皮生长因子VEGF的mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。空白对照组和阴性对照组比较无明显变化,差异无统计学意义(P<0.05)。结论 人MG-63骨肉瘤细胞COX-2基因被抑制后,MG-63骨肉瘤细胞增值、侵袭、迁移能力明显下降。

关键词: MG-63骨肉瘤细胞, RNA干扰, 迁移, 侵袭

中图分类号: