摘要：

目的 建立表达、纯化结构完整的全长人PPAR-γ的方法。方法 构建pReceiver-B01-PPAR-γ质粒并转化E.coliBL21(DE3)细胞，诱导表达重组蛋白，优化细胞生长条件；利用亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化重组蛋白；胶内酶解重组蛋白，用离子阱质谱仪分析二维AgilentHPLC-Chip纯化的酶解片段；基于MS/MS搜索IPI、Swiss-Prot、NCBInr和MSDB数据库，鉴定重组蛋白。结果 在优化的细胞生长条件(TB介质、37℃、0.8mMIPTG、诱导3h)，从每升TB中可获得280mg重组蛋白；两步纯化后，获得176mg、纯度为95%的均质重组PPAR-γ蛋白；经质谱分析和搜索蛋白质数据库，获得均匀地分布在整个PPAR-γ多肽链中的33个阳性肽段，覆盖率为60%，表明重组蛋白为结构完整的全长人PPAR-γ。配体结合活性位点S289、H323、H449和Y473无突变，保证全长人PPAR-γ与配体结合的生物学活性。结论 本文所建立的方法能成功用于大量表达结构完整的全长人PPAR-γ，有利于进一步的结构、功能研究和活性配体的筛选。

关键词: 全长人过氧化物酶体增殖物激活受体, 表达, 纯化, 结构确定

中图分类号: 

• Q812